1. 无菌检查法
1.1变更内容
1.1.1无菌检查方面，使用胰酪胨大豆液体培养基取代改良马丁培养基与硫乙醇酸盐流体培养基配合进行细菌和真菌的全面微生物检测。
1.1.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆液体培养基、胰酪胨大豆琼脂培养基取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和大肠埃希氏菌的菌液制备。
1.1.3菌液制备环节，使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更。
1.1.4适用性试验中，胰酪胨大豆液体培养基使用枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉进行灵敏度检查；硫乙醇酸盐流体培养基使用金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌进行灵敏度检查。
1.2 培养基信息
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2010版 |
2015版 |
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无菌检查/菌液制备—M5601B—硫乙醇酸盐流体培养基 无菌检查/菌液制备—M4101B—改良马丁培养基 菌液制备—M4102B—改良马丁琼脂培养基 菌液制备—M0005B—营养肉汤 菌液制备—M0006B—营养琼脂 无菌检查—M0007B—0.5%葡萄糖肉汤培养基 供试品制备—M0910B—0.1%蛋白胨水培养基
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无菌检查/菌液制备—M5601B—硫乙醇酸盐流体培养基 无菌检查/菌液制备—M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 菌液制备—M0002B—胰酪大豆胨琼脂培养基 菌液制备—M4108B—沙氏葡萄糖琼脂培养基 菌液制备—M4109B—沙氏葡萄糖肉汤培养基 无菌检查—M0007B—0.5%葡萄糖肉汤培养基 供试品制备—M0910B—0.1%蛋白胨水培养基 供试品制备—M0008B—pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液 |
2. 非无菌产品微生物限度检查
2.1 变更内容
2.1.1 供试品制备环节，除了pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液、pH7.6磷酸盐缓冲液外，添加了pH7.2磷酸盐缓冲液和胰酪胨大豆液体培养基。
2.1.2菌液制备环节，使用胰酪胨大豆液体培养基、胰酪胨大豆琼脂培养基取代营养肉汤、营养琼脂进行金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、乙型副伤寒沙门氏菌和大肠埃希氏菌的菌液制备；使用沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基取代改良马丁培养基、改良马丁琼脂进行白色念珠菌和黑曲霉菌液的制备，同时对沙氏葡萄糖液体培养基、沙氏葡萄糖琼脂的配方进行了变更；使用梭菌增菌培养基取代硫乙醇酸盐流体培养基进行生孢梭菌菌液的制备。
2.1.3 微生物计数环节，使用胰酪胨大豆琼脂培养基取代营养琼脂进行需氧菌计数；增加需氧菌的MPN法计数，该方法使用胰酪胨大豆液体培养基；使用沙氏葡萄糖琼脂培养基取代玫瑰红钠琼脂进行霉菌和酵母菌总数测定，同时增加玫瑰红钠琼脂、沙氏葡萄糖琼脂培养基(含抗生素)两种选择性培养基于对因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求情况下的霉菌和酵母菌计数；取消了使用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)对酵母菌进行计数的试验环节。
同时2015版中使用“需氧菌”取代了以往的“细菌”，从而使得胰酪胨大豆琼脂培养基计数所得不仅仅代表细菌，而是还包含真菌等其它在此培养基上生长的微生物菌落。
2.1.3 增加了耐盐革兰氏阴性菌的检验项目。
2.1.5简化了大肠埃希氏菌的检验流程。
2.1.6 取消了对大肠菌群的检验。
2.1.7变更了沙门氏菌检验中前增菌、增菌、分离用的所有培养基类别。
2.1.8 变更了铜绿假单胞菌检验中增菌、分离用的培养基类别，取消了绿脓菌素的直接试验。
2.1.9 取消了金黄色葡萄球菌的选择性增菌，改为无选择性增菌，同时变更了分离培养基。
2.1.10梭菌检验流程基本无变化，仅取消了对3%过氧化氢酶试验的检验要求。
2.1.11 白色念珠菌的检验取消了牙管试验，其余方法未变，但所用培养基配方有所调整。
2.2 培养基信息
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2010版 |
2015版 |
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供试品制备 |
M0008B—pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液 M0911B—pH6.8磷酸盐缓冲液 M0912B—pH7.6磷酸盐缓冲液 |
M0008B—pH7.0氯化钠—蛋白胨缓冲液 M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 M0911B—pH6.8磷酸盐缓冲液 M0912B—pH7.6磷酸盐缓冲液 M0913B—pH7.2磷酸盐缓冲液 |
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菌 液 制 备 |
菌液制备—M0005B—营养肉汤 菌液制备—M0006B—营养琼脂 菌液制备—M4101B—改良马丁培养基 菌液制备—M4102B—改良马丁琼脂培养基 菌液制备—M5601B—硫乙醇酸盐流体培养基 菌液稀释—0.9%无菌氯化钠溶液 菌液稀释—含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液（霉菌孢子悬液制备） |
菌液制备—M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 菌液制备—M0002B—胰酪大豆胨琼脂培养基 菌液制备—M4109B—沙氏萄萄糖液体培养基 菌液制备—M4108B—沙氏葡萄糖琼脂培养基 菌液制备—M5604B—梭菌增菌培养基 霉菌制备—M4110B—马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) 菌液稀释—0.9%无菌氯化钠溶液 菌液稀释—M0008B—pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 菌液稀释—含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液（霉菌孢子悬液制备） |
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微生物计数
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细菌计数—M0006B—营养琼脂 霉菌和酵母菌计数—M4103B—玫瑰红钠琼脂 酵母菌计数—M4101B—酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD) |
需氧菌计数—M0002B—胰酪大豆胨琼脂培养基 需氧菌MPN计数—M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 霉菌和酵母菌计数—M4108B—沙氏葡萄糖琼脂培养基 霉菌和酵母菌计数—M4182B—沙氏葡萄糖琼脂培养基(含抗生素) 霉菌和酵母菌计数—M4103B—玫瑰红钠琼脂 |
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耐胆盐革兰氏阴性菌 |
无 |
M2007B—肠道菌增菌液体培养基 M2005B—紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基 |
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大肠埃希氏菌 |
增菌—M1002B—乳糖胆盐发酵培养基 初步鉴定—M1005A—MUG培养基 初步鉴定—Kovacs氏靛基质试剂 分离—M1003B—曙红亚甲蓝琼脂培养基 分离—M1004B—麦康凯琼脂培养基(MacC) 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
增菌—M2055B—麦康凯液体培养基 分离—M2054B—麦康凯琼脂培养基 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
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大肠菌群 |
增菌鉴定—M1002B—乳糖胆盐发酵培养基 分离—M1003B—曙红亚甲蓝琼脂培养基 分离—M1004B—麦康凯琼脂培养基(MacC) 鉴别—M1006B—乳糖发酵培养基 |
无 |
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沙门氏菌 |
前增菌—M0005B—营养肉汤 增菌—M2002B—四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)基础 分离—M2004B—胆盐硫乳琼脂培养基(DHL) 分离—M2003B—沙门、志贺菌属琼脂培养基 分离—M1003B—曙红亚甲蓝琼脂培养基 分离—M1004B—麦康凯琼脂培养基(MacC) 初步鉴别—M0009B—三糖铁琼脂培养基(TSI) 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
前增菌—M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 增菌—M2015B—RV沙门菌增菌液体培养基 分离—M2010B—木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂 初步鉴别—M0009B—三糖铁琼脂培养基(TSI) 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
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铜绿假单胞菌 |
增菌—M1001B—胆盐乳糖培养基(BL) 分离—M3001B—溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基 纯化—M0006B—营养琼脂 鉴别—M3002B—绿脓菌素测定用培养基(PDP)基础(添加S0502) 鉴别—T010—氧化酶试纸 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
增菌—M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 分离—M3003B—溴十六烷三甲铵琼脂培养基基础（添加S0502） 鉴别—T010—氧化酶试纸 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
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金黄色葡萄球菌 |
增菌—M0005B—营养肉汤(NB) 选择性增菌—S3401—亚碲酸钾溶液 分离—M3401B—卵黄氯化钠琼脂培养基基础(添加S3402) 分离—M3402B—甘露醇氯化钠琼脂 纯化—M0006B—营养琼脂 血浆凝固酶试验 |
增菌—M0001B—胰酪大豆胨液体培养基 分离—M3402B—甘露醇氯化钠琼脂培养基 纯化鉴定—未明确规定鉴定方法 |
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梭菌 |
增菌—M5604B—梭菌增菌培养基 分离—M5602B—哥伦比亚琼脂培养基基础（添加S5601庆大霉素） 鉴别—T040—3%过氧化氢溶液 |
增菌—M5604B—梭菌增菌培养基 分离—M5602B—哥伦比亚琼脂培养基基础（添加S5601庆大霉素） 鉴别—T040—3%过氧化氢溶液 |
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白色念珠菌 |
增菌—M4105B—沙氏葡萄糖液体培养基 分离—M4106B—沙氏葡萄糖琼脂培养基 鉴别—M2509A—念珠菌显色培养基 鉴别—M4107A—1%吐温80—玉米琼脂培养基基础（添加S4101） |
增菌—M4109B—沙氏萄萄糖液体培养基 分离—M4108B—沙氏葡萄糖琼脂培养基 鉴别—M2509A—念珠菌显色培养基 |
3. 纯化水、注射用水检验标准
3.1方法——膜过滤法
3.2 培养基
3.2.1干粉培养基 M0011B—R2A琼脂
3.2.1 预罐装无菌培养基 P0008—R2A琼脂—90mm—10个/包 三层真空包装